所需材料
1、儀器：細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、臺(tái)式離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、移液槍、移液管移液器、4℃和-20℃冰箱、6孔培養(yǎng)板、直尺、maker筆。
2、試劑：細(xì)胞適配培養(yǎng)基、FBS、PBS、胰酶、樣本溶劑。
實(shí)驗(yàn)步驟
1、劃線：先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃?rùn)M線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔，每孔至少穿過5條線；
2、鋪板：處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液，接種于6孔培養(yǎng)板；細(xì)胞鋪板6w/孔，接種原則為過夜后融合率達(dá)到100%，每孔最終的培養(yǎng)基總量2mL；
3、細(xì)胞培養(yǎng)37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；
4、劃痕：第二天用200微升槍頭比著6孔板蓋子或直尺，平行或垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜；
5、清洗：PBS沖洗細(xì)胞3次，除去劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基；
6、拍照：擦去6孔板背后的marker橫線劃痕。4倍鏡下進(jìn)行拍照，保證劃痕居中且垂直，注意背景一致，加入待測(cè)樣本，設(shè)置濃度梯度，可按0，6，12，24h時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照。
7、結(jié)果分析，使用Image J軟件打開圖片后，隨機(jī)劃取6至8條水平線，計(jì)算細(xì)胞間距離的均值或者劃痕面積均值。
8、數(shù)據(jù)處理：
細(xì)胞遷移率(傷口愈合率)=(初始劃痕面積-t時(shí)刻劃痕面積)/初始劃痕面積
細(xì)胞遷移率(傷口愈合率)=(初始細(xì)胞間距離均值-t時(shí)刻細(xì)胞間距離均值)/初始細(xì)胞間距離均值